技術(shù)原理

技術(shù)原理 原位測(cè)序技術(shù) (In Situ Sequencing,ISS) 依賴(lài)于雙連接和滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)，它是以缺口靶向(Gap-targeted Sequencing) 或條形碼靶向 (Barcode-targeted Sequencing) 為測(cè)序策略，同時(shí)引入邊連接邊測(cè)序的化學(xué)原理（Sequencing-by-ligation Chemistry)，以滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物為測(cè)序媒介進(jìn)而在組織或細(xì)胞原位對(duì)RNA實(shí)現(xiàn)短片段測(cè)序的技術(shù)。

技術(shù)流程

(1)定制探針：針對(duì)用戶提供的基因的非保守區(qū)設(shè)計(jì)探針并合成

(2)樣本前處理：將冰凍切片退凍、固定、脫水和透化，以便探針和反應(yīng)所需的酶等成分進(jìn)入組織細(xì)胞內(nèi)部

(3)探針雜交與滾環(huán)擴(kuò)增：探針與RNA雜交，之后連接成環(huán)；通過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)放大編碼信號(hào)

(4)原位成像：利用邊合成邊測(cè)序的化學(xué)原理，通過(guò)采集熒光信號(hào)得到對(duì)應(yīng)位置的編碼堿基；經(jīng)過(guò)序列解碼，可識(shí)別出該位置靶向結(jié)合的基因

(5)圖像分析：獲得每個(gè)靶基因在組織中的空間表達(dá)位置，用不同符號(hào)(或顏色)標(biāo)記在同一張組織圖像中；通過(guò)細(xì)胞邊界識(shí)別等方法得到單細(xì)胞水平的基因表達(dá)定量數(shù)據(jù)，可進(jìn)行高級(jí)分析

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

(1)高效、特異、高敏

(2)高信噪比

(3)可實(shí)現(xiàn)256種靶標(biāo)分子檢測(cè)

(4)亞細(xì)胞分辨率

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1. 冷凍組織OCT包埋樣本或者切片
2. 石蠟包埋組織樣本或者切片（FFPE樣本） 
3. 細(xì)胞爬片樣本等