單細(xì)胞免疫組庫(kù)（V(D)J）測(cè)序
技術(shù)原理
（10x Genomics單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組為例）
1. 形成GEMs 基于微流控芯片形成油包水（GEMs），每個(gè)油包水內(nèi)含有一個(gè)細(xì)胞、一個(gè)gel bead以及逆轉(zhuǎn)錄需要的引物試劑和酶等，單個(gè)GEM內(nèi)可進(jìn)行獨(dú)立逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)互不干擾。
2. 標(biāo)記細(xì)胞和RNA分子 Gel bead上帶有標(biāo)簽，GEMs進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，可將10x barcode（10x BC，用來(lái)標(biāo)記細(xì)胞)、UMI（標(biāo)記本底R(shí)NA進(jìn)行定量）加在每個(gè)mRNA分子上。
3. 巢式PCR富集全長(zhǎng)V(D)J序列 基于T細(xì)胞和B細(xì)胞VDJ序列設(shè)計(jì)巢式PCR引物，富集全長(zhǎng)V(D)J序列
實(shí)驗(yàn)流程
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
1）可實(shí)現(xiàn)成對(duì)的重鏈和輕鏈（B細(xì)胞）或α和β鏈（T細(xì)胞）的全長(zhǎng)測(cè)序；
2）精細(xì)到單細(xì)胞水平，能獲得大量單細(xì)胞的免疫組庫(kù)數(shù)據(jù)；
3）同批樣本可同時(shí)獲得mRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù)和免疫組庫(kù)數(shù)據(jù)；
送樣要求
相關(guān)資料下載
微信客服