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FLex RNA單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序
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  • 產(chǎn)品描述

    單細(xì)胞Fixed RNA為10x Genomics于2022年3月推出的新產(chǎn)品,采用4%的PFA對細(xì)胞進(jìn)行固定,鎖定RNA的表達(dá)狀態(tài),建庫時通過探針雜交捕獲基因,可覆蓋18,000多個基因,解決了單細(xì)胞樣本儲存、多樣本批量處理以及混樣測序的問題,讓單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組的研究更加靈活。
        Fixed RNA可以保留脆弱細(xì)胞或動態(tài)的生物學(xué)狀態(tài),將分析擴(kuò)展到更多樣本,樣本固定后集中處理,在同一次運(yùn)行中批量操作實(shí)驗(yàn)和分析,最大限度減少實(shí)驗(yàn)可變性和批次效應(yīng),單通道中最多可混16個樣品,每個樣本捕獲8,000-10,000細(xì)胞,單張芯片最多可混128個樣本,最多可得1,024,000個細(xì)胞,混樣大大降低實(shí)驗(yàn)成本。


    產(chǎn)品優(yōu)勢

    • 擴(kuò)大了樣本范圍能對FFPE細(xì)胞和組織,以及PFA固定樣本進(jìn)行單細(xì)胞測序分析,而不再受限于是否有新鮮組織可用,可以解鎖大量儲存在醫(yī)院以及生物樣本庫中的 FFPE 樣本的寶貴信息。

    • 提升了低表達(dá)基因檢測靈敏度特異性的探針設(shè)計,根據(jù)Flex和3’轉(zhuǎn)錄組的實(shí)測對比數(shù)據(jù)結(jié)果,在多種樣本類型中,相同的測序數(shù)據(jù)量下,F(xiàn)lex所得的測序數(shù)據(jù)飽和度更高,探針靈敏度更強(qiáng),單個細(xì)胞內(nèi)可以檢測到的基因數(shù)更多。

    • 減少了樣本采集運(yùn)輸難度:采集方面,樣本的及時固定,可使取樣更靈活,擴(kuò)散到多個采集點(diǎn)的同時減少取樣時間限制。運(yùn)輸方面,長距離運(yùn)輸?shù)膲毫ψ冃?,也適合多中心合作的應(yīng)用場景。

    • 降低批次效應(yīng):對于獲取時間不規(guī)律的腫瘤樣本、發(fā)育生物學(xué)中同一來源不同時間點(diǎn)的樣本、治療預(yù)后相關(guān)的臨床樣本等場景中樣本分批次采集的情況,可以應(yīng)用Flex同批次進(jìn)行雜交建庫實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)梯度設(shè)置更準(zhǔn)確,同時降低結(jié)果可變性。

    • 鎖定瞬時表達(dá):對于異質(zhì)性較強(qiáng),生物學(xué)狀態(tài)快速變化的樣本,其細(xì)胞離體后,可能會受到較多外界壓力和影響,F(xiàn)lex經(jīng)過PFA及時固定,已經(jīng)鎖定了樣本瞬時的表達(dá)狀態(tài)。非常適合瀕死樣本、多階段變化樣本、脆弱樣本、需先進(jìn)行病理分型的樣本等。

    • 便與Cytassist空轉(zhuǎn)聯(lián)合分析:Flex技術(shù)與Visium Cytassist空轉(zhuǎn)技術(shù)結(jié)合,通過同一套探針對同一FFPE樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和空間轉(zhuǎn)錄組研究,基因表達(dá)一致性更高,數(shù)據(jù)聯(lián)合分析匹配性更好。

    實(shí)驗(yàn)流程






  • 樣本類型建議送樣量存儲介質(zhì)保存、運(yùn)輸條件
    FFPEA.切片組織面積大于1cm2,切片表面無劃痕,無干裂,均勻貼片的石蠟切片;
    B.切片組織細(xì)胞>30000個;有核細(xì)胞比例>80%;腫瘤細(xì)胞比例>20%,白片厚度5~ 10um,需3-5片,組織面積偏小或細(xì)胞核占比未達(dá)80%以上,需提供5-12片;
    C.石蠟塊:厚度4mm以上,組織約綠豆大小以上;
    D.蠟卷:厚度25um左右,2-5卷
    /4℃或常溫保存和運(yùn)輸
    新鮮組織>50mg存放于組織保存液中,最多可保存48h,單個樣本用量1.5ml即可碎冰運(yùn)輸,冰袋運(yùn)送注意溫度勿過低導(dǎo)致懸液凍結(jié)
    單細(xì)胞懸液>1x10^5存放于DPBS中,可添加FBS或BSA保持細(xì)胞活性,運(yùn)輸勿超過4h碎冰運(yùn)輸,冰袋運(yùn)送注意溫度勿過低導(dǎo)致懸液凍結(jié)
    凍存細(xì)胞>1x10^5存放于細(xì)胞凍存液中,細(xì)胞凍存液可用DMEM+20%FBS+10%DMSO-80℃保存,干冰運(yùn)送,干冰用量按照每天4KG
    冷凍組織>50mg.1.5ml離心管液氮速凍-80℃保存,干冰運(yùn)送,干冰用量按照每天4KG
    OCT包埋
    冷凍組織
    >50mg/-80℃保存,干冰運(yùn)送,干冰用量按照每天4KG
    4%甲醛
    固定細(xì)胞
    >1x10^5/-80℃保存,干冰運(yùn)送,干冰用量按照每天4KG
    4%甲醛
    固定組織
    >50mg/-80℃保存,干冰運(yùn)送,干冰用量按照每天4KG


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