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RNA熒光原位雜交（ISH）
ISH RNA熒光原位檢測(cè)試劑盒，可以針對(duì)不同mRNA/lncRNA等靶標(biāo)RNA分子定制探針，進(jìn)行表達(dá)水平和空間位置驗(yàn)證。該產(chǎn)品一次可以同時(shí)驗(yàn)證1~4個(gè)靶標(biāo)，提供了一種亞細(xì)胞分辨率、高靈敏度、高特異性的科研驗(yàn)證工具。

技術(shù)原理

技術(shù)原理 SEERNA?ISH RNA熒光原位檢測(cè)是基于信號(hào)放大的單分子 RNA 熒光原位雜交技術(shù)，通過(guò)配對(duì)設(shè)計(jì)的 DNA 連接探針（DLPs）與靶標(biāo) RNA 分子互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，然后使用具有以RNA為模板進(jìn)行DNA連接能力的連接酶，進(jìn)行 DLPs 的第一步連接成半環(huán)；之后以互補(bǔ)的 DNA 為模板，在 Splint連接酶的作用下實(shí)現(xiàn) DLPs 的成環(huán)；隨后在 DNA 聚合酶的作用下，進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大；最后在滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物上，雜交帶有單個(gè)熒光基團(tuán)標(biāo)記的檢測(cè)探針，進(jìn)行熒光顯微拍照成像。

實(shí)驗(yàn)流程

（1）樣本前處理

            冰凍樣本：切片退凍、固定、脫水和透化等，以便探針和反應(yīng)所需的酶等成分進(jìn)入；
            FFPE樣本：烤片、脫蠟、復(fù)水、固定、復(fù)性、透化和脫水等。
   （2）探針雜交與滾環(huán)擴(kuò)增：探針與RNA雜交之后連接成環(huán)，通過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增放大信號(hào)；
   （3）熒光成像：檢測(cè)探針攜帶特定熒光基團(tuán)，與靶標(biāo)基因雜交探針特異性結(jié)合，在顯微鏡下選擇合適的熒光濾塊和曝光            時(shí)間進(jìn)行掃描成像，通過(guò)識(shí)別熒光信號(hào)確定該位置靶向結(jié)合的基因；
   （4）圖像分析：在組織圖像中標(biāo)記每個(gè)靶基因，可以進(jìn)行信號(hào)點(diǎn)計(jì)數(shù)分析。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

(1) 高效、特異、高敏

(2) 高信噪比

(3) 可實(shí)現(xiàn)256種靶標(biāo)分子檢測(cè)

(4) 亞細(xì)胞分辨率


技術(shù)優(yōu)勢(shì)

產(chǎn)品性能
  • 單RNA分子檢測(cè)
  • 探針設(shè)計(jì)特異性強(qiáng)
  • 5~10對(duì)探針/靶標(biāo)、靈敏度高 
  • 信號(hào)放大、信噪比高

 熒光通道
  • DAPI 通道、GFP/Cy3/Cy3.5/Cy5/Cy7 通道均適用 
  • （Alexa Fluor 488/Cy3/Texas Red/Cy5/Alexa Fluor 750）

樣本和靶標(biāo)

靶標(biāo)：同時(shí)檢測(cè)1~4個(gè)靶標(biāo)RNA（mRNA、LncRNA、circRNA、可變剪切等）

樣本：細(xì)胞爬片、新鮮冰凍OCT包埋組織切片（FF） 、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片和固定后冰凍組織切片  

檢測(cè)結(jié)果展示
送樣要求
  1. 細(xì)胞爬片
  2. 新鮮冰凍OCT包埋組織切片（FF） 
  3. 福爾 馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片
  4. 固定后冰凍組織切片